Kryopreservering av gameter i fiskar

I denna artikel kommer vi att diskutera om cryopreservering av gameter i fiskar.

Cryopreservation är en lagringsteknik med praktiskt taget inga tidsgränser. Bevarande av fiskjakter har testats med denna teknik. Kryopreserveringen av spermier är ett väletablerat förfarande inom djurhållning.

Kryopreserverade spermier används nu framgångsrikt vid inseminering av boskap, häst, gris, får och fjäderfä. Det är intressant att notera att stora ansträngningar har gjorts för att överföra denna teknik till bevarande av spermier, ägg och embryon av fisk.

Denna teknik kommer att hjälpa fiskuppfödarna på följande sätt:

(1) Problemet med oavsiktlig mognad av man och kvinna kan övervinna om spermier eller ägg hålls förvaring.

(2) Programmet för selektiv uppfödning kan genomföras som kommer att förbättra ursprungsbefolkningen och hjälpa tredje världen att uppföda sina inhemska arter och att producera speciella stammar av överlägsen stjälk.

(3) Tekniken för cryopreservering av gameter kommer att spela en viktig roll för bevarande av inhemska germplasmer, eftersom många indiska indiska fiskar inte kan konkurrera med exotiska fiskar. Med denna teknik bankas gameterna från hotade arter som en häck mot minskande genetisk variation som orsakas av miljöförstörningar.

(4) Det kan hjälpa till med produktion av monokönskultur.

(5) Om gameterna kan bevaras framgångsrikt kan vi utveckla fisk under hela året enligt vårt krav och kunna bidra till att etablera genbank för att bevara befolkningens genetiska originalitet och hålla dem tillgängliga för återintroduktion när de allmänna förutsättningarna för överlevnad har förbättrats.

Spermierna, ägg och embryon kan kryopreserveras, men bevarande av ägg och embryon är svårt på grund av otillgängligheten av cryoprotectant att absorberas tillräckligt i dessa celler på grund av deras stora storlek i jämförelse med spermier.

Kryopreserveringen av spermatozoa hos fisken är framgångsrik hos människan; arter Dessa arter är Oncorhynchus, Salmo, Salvilinus fontinalis, Hucho hucho, Thymallus thymallus, Esox lucius och Cyprinus carpio, Serothodon mossambicus; Labeo Rohita, Catla Catla och Cirrhinus Mrigala.

Följande steg ska följas vid bevarande av spermatozoa:

(1) Samling av milt (sperma).

(2) Framställning av extenderlösning.

(3) Urval av kryoskyddande medel.

(4) Frysning.

(5) Framgång vid befruktning.

Samling av smuts:

Det första steget är att samla spermier. Normalt samlas spermierna från friska fiskar genom strippningsmetod. Katetern kan användas, vilket är bättre alternativ till strippning. De manliga uppfödarna med bästa karakteristiska egenskaper valdes och tvättades med Ringers lösning och genital papillegionen görs torkad.

Brodern kan vara bedövad eller ej bedövad. Den anestesi som vanligtvis användes är 0, 3 ml / 1 fenoxietanol. Enligt Kumar (1989) ger en injektion av suston 250 (organon) före strippning bättre resultat i indiska karp. Majoriteten av arbetstagare inom detta område rekommenderade oanestetiserade fiskar för avdrivning för att få milt.

Mjältet samlas in i sprutor eller hemolysrör och senare bevaras i glasampuller (förseglade eller osealed), plastrullar och ofta i plastpåsar. Färgen, volymen, densiteten, pH och motiliteten hos spermier ska noteras.

Provet ska vara fritt från urin och fekalitet. Ett urval av provet ska undersökas under mikroskop för att märka abnormiteter i spermier. Om provet är OK, lägg sedan till vidare bearbetning, annars kan nytt prov från nya köttmaskiner tas.

Under perioden för uppsamling och konservering av spermatozoa kan sprutan / ampullen / halmen hållas i dammvatten för att upprätthålla konstant temperatur. Legendariska och Billard (1980) samlade spermier i hemolysrör i smältande is och lagrades därefter på en kyld yta vid 4 ° C.

Förberedelsen och valet av extender, en lösning i vilken sår uppsamlas, är mest kritisk för kryopreservering. Förstärkaren förhindrar uttömning av spermieenergi och upprätthåller spermier i uppskattat tillstånd men levande.

Det finns två grundläggande förlängare. De kallas Mounibs medium (M) och Menezo medium (Me). I dessa två medier tillsätts bovint serunalbumin (BSA) och telluritäggägg. För indiska fiskar provades flera extenders genom att modifiera i deras följande beståndsdelar.

De vanliga beståndsdelarna är natriumklorid, KCl, CaCl2, NaHC03, Na2HP04 och MgS04. Utöver dessa tillsätts också näringsämnen och glycin för att förbättra kryopreserveringen. Antibiotika, såsom gentomycin eller streptomycin, tillsättes även vid förlängningslösningen om så behövs.

frysskyddsmedel:

Kryoskyddsmedlets huvuduppgift är att tränga in i cellen och kan hjälpa spermatozoa att tolerera frysningstemperaturen. Den viktigaste och mest använda är DSMO (dimetylsulfoxid) och glycerol. Harvey (1983) använde metanol, DSMO och glycerol i kombination med mjölkpulver eller äggulor.

Kryoskydds- och förlängningslösning i ett fast förhållande, i allmänhet är en del av kryoskyddsmedel och nio delar av extenderlösningen känt som utspädningsmedel. I detta utspädningsmaterial samlas spermierna för vidare bearbetning för frysning.

Spädningsmedlet (kryoprotektant + extender + spermier) tas i polyvinylstrålar och båda ändarna av strån är täta och nu är de redo att frysa eller kyla. Malten kan kylas, temperaturen hålls mellan 0-5 ^o C. Vid frysning används CO2 och flytande kväve. Kyld förvaring av teleostmält (0-50 ^o C) har studerats i stor utsträckning i laxfisk.

Vid frysning bör många problem som kallstöt, bildande av intracellulär is och osmotisk chock kontrolleras. Kryopreservering betyder i allmänhet förvaring av celler eller vävnader vid -196 ^° C, temperaturen för flytande kväve (bild 22.1).

Cellskada bör kontrolleras. Tre typer av cellskada uppträder vanligtvis. Den första är kall chock, vilket orsakas av kylning över frysningstemperaturer. Detta är viktigare för ägg, inte så mycket viktigt för spermier.

Detta sker upp till 0 ° C. När temperaturen går från 0 ° C och -80 ° C sker osmotisk chock och bildning av intracellulär is i ägg och sperma. För lyckad cryopreservation kontrolleras dessa saker.

Kort sagt, strömmarna innehållande utspädningsmedel överförs till burkbehållare. Cannisterna som håller sugrör efter att ha tillåtit varierande jämviktsperiod dyppas först i flytande kväveångor och därefter till flytande kväve vid temperaturen -196 ° C. Legendra och Billard (1980) lagrade spermierna av regnbågsfröer i torris (fast CO ₂ -79 ° C) eller i flytande kväve upp till 6 månader.

I ett antal färskvattenarter har frysning utförts genom pelletering av spermier i torr is. Övergången från 0 ° C till -70 ° C varar ungefär 2 minuter vilket resulterar i en hastighet av 35 ^° C / min. Eftersom hastigheten minskar över - 60 ° C. De bästa resultaten erhålls i flytande kväve.

upptining:

Upptining är omvänd händelse av frysning. Upptining sker i vattenbad vid temperaturer mellan 10 ° C och 60 ° C. Framgången för hela proceduren beror på spermatozoas rörlighet och förmåga att fertilisera ägg.

Stoss och Holtz (1982) har ökat motiliteten hos rosa laxspermatozoa från 30 sekunder till 10 minuter genom att aktivera med en 120 nm NaHCO3-lösning till vilken 1 BMX (3-isobutyl-l-metylxanthi) hade tillsatts. Kumar (1989) uppgav att längden av lagringsperioden är ca 20 dagar i L. rohita och H. molitrix under kryogentillstånd.

Äggen av Salmo gairdeneri, Onchorhynchus kisutch och O.keta fixerades genom avlägsnande genom processen för avdrivning och försegling i plastpåse tillsammans med koelomvätska och förvarades under syre vid 1 ° C. Äggen får sedan sprida sig för att bilda ett lager ett eller två ägg djupt.

Äggen blandades sedan med extenderlösning och kryoskyddsmedel nästan på liknande sätt som tidigare beskrivits för spermier. Enligt Harvey och Kelley (1984) har fryst lagring av ägg varit måttligt framgångsrik i laxfiskar, med lagringstider på några veckor erhållna genom kylning av syreformiga ägg i koelomvätska.