Triple Sugar Iron Test på bakterier för att hitta möjligheten att producera vätesulfid (med figur)

Läs den här artikeln för att lära dig om det trippel sockerjärntestet på bakterier för att hitta möjligheten att producera vätesulfid!

Syftar till att utföra trippel sockerjärntest (TSI-test) för att ta reda på en bakteries förmåga att använda någon eller flera av de tre sockerarterna, såsom glukos, sackaros och laktos, samt dess förmåga att producera vätesulfid (H2 S), vilket minskar järn.

Princip:

Vissa bakterier har förmågan att utnyttja en eller flera av de tre sockerarterna, såsom glukos, sackaros och laktos.

Om någon eller flera av de tre sockerarterna (triplesocker) utnyttjas, produceras syra, vilket minskar pH-värdet, vilket ändrar färgen av fenolrött från rött till gult.

Dessutom har vissa bakterier förmågan att producera vätesulfid (H2S) genom användning av svavelföreningar. Den så framställda H 2 S kombinerar med järnföreningen, järnsulfat, för att bilda svarta fällningar av järnsulfid.

I triple-sockerjärntestet (TSI-testet) odlas testbakterierna på agarskenor innehållande glukos, sackaros, laktos, fenolröd, natriumtiosulfat och järnsulfat. Medan mediet innehåller glukos (dvs D-glukos eller dextros) vid en låg koncentration av 0, 1% hålls koncentrationen av sackaros och laktos högt vid 1%.

Om bakterierna har förmåga att använda någon av de tre sockerarterna, ändras mediet färg från rött till gult. Om bakterierna har förmåga att producera H 2 S, får mediet en svart färg. Eftersom tre sockerarter och en järnförening används i mediet kallas testet trippelt sockerstrykprov.

Material som krävs:

Provrör, konisk kolv, bomullsproppar, inokuleringsnål, autoklav, bunsenbrännare, laminärflödeskammare, kassera burk, inkubator, trippel sockerjärn (TSI) agar, isolerade kolonier eller rena bakteriekulturer.

Procedur:

1. Ingredienserna i TSI-agarmedium (innehållande 3 sockerarter och järn som huvudkomponenter) eller dess färdiga pulver som krävs för 100 ml av mediet vägs och löses i 100 ml destillerat vatten i en 250 ml konisk flaska genom skakar och virvlar (Figur 7.7).

2. pH-värdet bestäms med pH-papper eller pH-mätare och justeras till 7.4 med 0, 1 N HCI om det är mer eller använder 0, 1N NaOH om det är mindre.

3. Kolven upphettas för att upplösa agar i mediet fullständigt.

4. Innan det stelnar, fördelas mediet i varmt smält tillstånd i 5 provrör (ca 20 ml vardera).

5. Provrören är bomullspluggade, täckta med hantverkspapper och bundet med tråd eller gummiband.

6. De steriliseras vid 121 ° C (15 psi tryck) i 15 minuter i en autoklav.

7. Efter sterilisering avlägsnas de från autoklaven och hålles i ett lutande läge för att kyla och stelna mediet för att få TSI-agarskenor.

8. Testbakterierna inokuleras aseptiskt, företrädesvis i en laminärflödeskammare, in i skenorna genom att sticka in i rumpan och strimma på ytan av skenorna med hjälp av en flamsteriliserad nål. Nålen steriliseras efter varje ympning.

9. De inokulerade skenorna inkuberas vid 37 ° C i 24 timmar i en inkubator.

observationer:

1. Gula rumpa och röda snedställningar med eller utan gasproduktion (raster i agarstödet):

Syrastöt och alkalisk lutning har bildats. Här har endast glukos använts anaerobt (fermentativt) vilket gör stumsyra (gult). Inget annat socker har använts. Eftersom koncentrationen av glukos är mindre (0, 1%) oxideras den lilla mängden syra som produceras på den sneda ytan snabbt och gör den alkalisk (röd).

Vidare producerar oxidativ dominans av pepton närvarande i mediet NHY som gör den sneda alkaliska (röda). I stummen upprätthålls sura tillståndet på grund av minskad tillgänglighet av syre och långsammare tillväxt av bakterierna. Således är bakterierna glukospositiva.

2. Gul rumpa och gul snedställning med eller utan gasproduktion:

Syran och syrahalten har bildats. Här har laktos och / eller sackaros fermenterats. Eftersom deras koncentration i mediet är hög, producerar de stora mängder syror, vilket resulterar i sur sned och sur stum och upprätthåller det sura tillståndet. Således är bakterierna sackaros / laktospositiv.

3. Röda rumpa och röda snedställningar:

Ingen av de tre sockerarterna har fermenterats. I stället har peptoner kataboliserats under anaeroba och / eller aeroba förhållanden, vilket resulterar i ett alkaliskt tillstånd på grund av ammoniakproduktion.

Om endast aerob nedbrytning av peptoner uppstår, blir endast den sneda ytan alkalisk (röd). Om det finns aerob och anaerob nedbrytning av pepton blir både snedställningen och roten alkalisk (röd). Således är bakterierna socker negativa.

4. Svullnad av rumpan:

Förutom något av ovanstående förhållanden, om blackening of butt förekommer, indikerar det att bakterierna kan producera H2S med användning av den oorganiska svavel (natriumtiosulfat) närvarande i mediet.

H 2 S kombinerar med järnsulfatet i mediet för att bilda svarta fällningar av järnsulfid, vilket resulterar i en ändring i färgen av mediet till svart. Således är bakterierna H2S-positiva.

5. Ingen svullnad av rumpa:

Bakterierna kan inte producera H2S med användning av den oorganiska svavel (natriumtiosulfat) närvarande i mediet. Således är bakterierna H2S-negativa.