Stärkelsehydrolys Test på bakterier för att ta reda på deras förmåga att hydrolysera stärkelse

Stärkelsehydrolys Test på bakterier för att ta reda på deras förmåga att hydrolysera stärkelse!

Princip:

Vissa bakterier har förmågan att hydrolysera stärkelse, eftersom de kan producera sackarolytiska enzymet.

Stärkelsen bildar mörkblå färg med jod, men dess hydrolyserade slutprodukter förvärvar inte sådan mörkblå färg med jod.

I stärkelsehydrolys-testet odlas testbakterierna på agarplattor innehållande stärkelse. Efter att bakteriernas kolonier är synliga, överskrids plattorna med jodlösning. Om bakterierna har förmåga att hydrolysera stärkelse hydrolyserar kolonierna stärkelsen i mediet i de omgivande områdena, medan resten av plattorna innehåller ohydrolyserad stärkelse.

Som ett resultat bildas transparenta klara zoner runt kolonierna när de översvämmas med jodlösning, eftersom de hydrolyserade produkterna som bildas kring dem inte bildar mörkblå färg med jod. Å andra sidan blir resten av plattans områden mörkblå, eftersom jod bildar mörkblå färg med den ohydrolyserade stärkelsen i dessa områden.

Material som krävs:

Petriskålar, konisk kolv, bomullsproppar, inokuleringsslinga, autoklav, bunsenbrännare, laminärflödeskammare, kassera burk, inkubator, stärkelsagar, Lugols jodlösning, isolerade kolonier eller rena bakteriekulturer.

Procedur:

1. Två petriskålar städas, täckas med hantverkspapper och binds med tråd eller gummiband (Figur 7.21). Detta steg såväl som steriliseringen av petriskålarna i steg 6 utelämnas om ugnssteriliserade petriskålar används direkt.

2. Beståndsdelarna i stärkelsagarmedium (innehållande stärkelse som huvudkomponent) eller dess färdiga pulver som krävs för 100 ml av mediet vägs och löses i 100 ml destillerat vatten i en 250 ml konisk kolv genom skakning och virvling.

3. Dess pH bestäms med hjälp av ett pH-papper eller pH-mätare och justeras till 7, 2 med 0, 1 N HCI om det är mer eller använder 0, 1N NaOH om det är mindre.

4. Kolven upphettas för att upplösa agar i mediet fullständigt.

5. Kolven är bomullspluggad, täckt med hantverkspapper och bundet med tråd eller gummiband.

6. De två petriskålarna och den koniska kolven innehållande stärkelsagarmedium steriliseras vid 121 ° C (15 psi tryck) i 15 minuter i en autoklav.

7. Efter sterilisering avlägsnas de från autoklaven och får svalna under en tid utan att mediet solidiseras. Kylning av mediet förhindrar kondens och ackumulering av vattendroppar inuti plattorna. Om mediet redan har beretts och stelnat under lagring, måste det vara flytande genom att värma försiktigt tills det smälter fullständigt.

8. För att bereda stärkelsagarplattor, kyls och stelnar det steriliserade stärkelsagarmediet i varmt smält tillstånd, aseptiskt, företrädesvis inuti en laminärflödeskammare, i de två steriliserade petriskålarna (ungefär 20 ml vardera) så att Det smälta mediet täcker helt ned petriskålen.

Därefter täcks plattorna med sina lock och får svalna för att stelna mediet i dem. Vattendamp som kan kondensera på plattans och lockens inre yta avdunstas genom att hålla plattorna och locken i ett inverterat läge i en inkubator vid 37 ° C under ca 1 timme.

9. Varje platta är märkt på undersidan till fyra fjärdedelar.

10. "Spotinoculation" av testbakterierna görs aseptiskt, företrädesvis inuti en laminärflödeskammare, i mitten av varje kvart genom att göra en fläck (eller smet) av bakterierna med hjälp av en flamsteriliserad slinga. Slingan steriliseras efter varje ympning.

11. De inokulerade plattorna inkuberas i inverterad position, nedtill, vid 37 ° C i 24 till 48 timmar i en inkubator tills kolonierna hos bakterierna är synliga.

12. Plattorna är översvämmade med Lugols jodlösning.