Krav på odling av bakterier (rikliga näringsämnen och optimala miljöförhållanden)

Grundkrav för odling av bakterier är: (I) Rika näringsämnen (II) Optimala miljöförhållanden

Bakterier är närvarande universellt nästan överallt; i mark, luft, vatten och till och med inuti mun och tarm hos alla djur. "Odling av bakterier" eller "bakteriekultur" innebär att dessa minuters osynliga bakterier växer i näringsrika ämnen och lämpliga miljöförhållanden, vilket stöder deras snabba tillväxt och multiplikation.

Detta resulterar i deras manifestation som stor population synlig för blotta ögat (som kolonier eller grumlig suspension). Således finns det två grundläggande krav för odling av bakterier, såsom (I) rikliga näringsämnen och (II) optimala miljöförhållanden.

(I) Rika näringsämnen:

I naturen tar bakterier upp de komplexa näringsämnena som finns tillgängliga kring dem efter att de försämrats dem till enklare former av de enzymer som utsöndras av dem. Men i laboratoriet ökas snabb tillväxt genom att odla dem i ämnen som innehåller näringsämnen i enklare former.

Dessa ämnen som innehåller tillräcklig mängd näringsämnen i enklare former för snabb tillväxt och multiplikation av bakterier kallas "kulturmedia". Det finns ett antal kulturmedier som nu finns tillgängliga med olika ingredienser. Kulturmedia erhålls i följande tre "fysiska former".

1. Flytande medium eller buljong:

Dessa är klara vätskor innehållande vatten och näringsämnen i enklare former för tillväxt av bakterier som har steriliserats i autoklav. När bakterier ympas in i dem och inkuberas under betingelser som är lämpliga för deras tillväxt, växer de kraftigt i tjocka suspensioner av bakterieceller, på grund av vilka medierna blir grumliga.

2. Solid Media:

Dessa är stelnade ämnen, i vilka flytande buljonger har kompletterats med ett stelningsmedel som kallas "agar", på en nivå mer än 1%. Agar är ett pulver (ibland kallat agar) extraherat från tångar och är ett komplext kolhydrat som huvudsakligen består av galaktos.

Det är viktigt att notera det; agar är ett solidifieringsmedel och har inget näringsvärde för bakterier. Den tjänar som ett utmärkt solidifieringsmedel, som i en vattenhaltig lösning kondenseras den vid 100 ° C och stelnar vid 40 ° C. De flesta av de patogena bakterierna hos människa odlas vid 37 ° C (normal människokroppstemperatur).

Agar smälter inte vid denna temperatur och ger en hård yta. På denna näringsrika rika hårda ytan växer varje enskild bakterie, multiplicerar och ger upphov till en isolerad koloni av dessa bakterier. Sådan isolering är inte möjlig i flytande media, där bakterier växer i suspension.

Fast agarmedium kan framställas i följande former:

(a) agarplattor:

Agarpulver, på en nivå av mer än 1%, löses fullständigt i flytande buljong genom uppvärmning. Därefter steriliseras det i en autoklav. Det förblir flytande i varmt tillstånd och stelnar när det kyls. I det varma vätsketillståndet hälls det i steriliserade petriskålar (20 ml i varje petriskål) och får svalna så att det bildar ett tjockt lager längst ner på petriskålarna.

Dessa petriskålar innehållande ett tjockt lager av stelnade agarmedia kallas "agarplattor" eller helt enkelt "plåtar". Bakterier odlas som isolerade kolonier på dessa plattor för deras uppräkning och isolering.

Karakteristiken hos dessa kolonier bidrar också till att identifiera bakterier. Petriskålar finns i olika storlekar för att uppfylla olika experimentella förhållanden. För rutinändamål används dock petriskålar med en diameter av 15 cm.

(b) Agar Slants:

För att förbereda "agar-slangar" eller helt enkelt "slangar", agarpulver, i en nivå av mer än 1%, löses fullständigt i flytande buljong genom uppvärmning. I det varma vätsketillståndet fördelas det i provrör (20 ml i varje provrör), bomullspluggat och steriliserat i autoklav.

Det steriliserade mediet i provrör får stelna i lutande läge för att få skenorna. Skenorna används för att upprätthålla rena stamkulturer av bakterier erhållna genom isolering på agarplattor.

Dessa används också för underhåll av standardreferenslagerkulturer erhållna från internationella standardlaboratorier. Rena kulturer och standardkulturer upprätthålls regelbundet (vanligtvis 15 dagar till 1 månad) överföring till friska skenor aseptiskt. Tillväxtegenskaperna på slangar hjälper också till att identifiera bakterier.

(c) Agar Deep Tubes:

Agar-djupa rör framställs enligt samma procedur som följt vid framställning av agarskenor förutom att här tillåts media efter sterilisering att stelna i upprätt läge. Dessa används främst för studier av gasformiga krav hos bakterier.

3. Semi Solid Media:

De innehåller agar på en nivå mindre än 1%, så att de förbli i halvfast tillstånd. De används för specifika studier.

(II) Optimala miljöförhållanden:

Flera miljöförhållanden påverkar bakteriens tillväxt. Att odla en bakterie bör vara försedd med en uppsättning optimala miljöförhållanden. De viktigaste miljöförhållanden som ska tillhandahållas vid odling av bakterier ges nedan.

1. Mediaens pH:

Varje bakterieart kan växa inom ett visst pH-område. För de flesta bakterier ligger detta intervall mellan 4 och 9. Men den maximala tillväxten av varje bakterieart förekommer inom ett mycket smalt pH-område. Detta optimala pH-intervall för de flesta bakterier är 6, 5-7, 5 och för de flesta svamparna är formar och jäst 4-6, eftersom de föredrar sura miljöer.

För att maximal tillväxt ska uppstå måste kulturmediumens pH justeras till detta pH under dess framställning. Kemiska ämnen som fungerar som buffertar (t.ex. KH 2 P0 4, K 2 HP0 4 ) läggs också till i media för att förhindra eventuella förändringar i pH som kan uppstå på grund av ackumulering av sura eller basala metaboliska slutprodukter som produceras av bakterierna under deras tillväxt .

2. Inkubationstemperatur:

Mesofiler inkuberas vid 37 ° C, termofiler vid 55 ° C och psykofiler vid 4 ° C.