Nitratreduceringstest på bakterier för att ta reda på förmågan att minska nitrat

Läs den här artikeln för att lära dig om hur nitratreduktionstestet på bakterier fungerar för att ta reda på deras förmåga att minska nitraterna!

Princip:

Vissa bakterier har förmågan att minska nitrater, eftersom de kan producera enzymet "nitratreduktas".

Detta enzym, i närvaro av lämplig elektrondonator, reducerar nitrater (N0 ₃ ^- ) till nitrit (N0 ₂ ^- ). Närvaron av N0 ₂ ^- indikeras av sulfanilsyra och a-naftylamin, vilket ändrar färgen till röd.

Vid nitratreduktionstestet odlas testbakterierna i en buljongmedium innehållande nitrat (N0 ₃ ^- ). Om bakterierna har förmåga att reducera nitrater, får buljongen en röd färg vid tillsats av sulfanilsyra och a-naftylamin.

Om röd färg inte produceras indikerar det att antingen N0 ₃ ^- inte reduceras av bakterierna alls eller bakterierna producerar mycket potent nitratreduktasenzym, vilket snabbt minskar N0 ₃ ^- bortom N0 ₂ ^- till NH ₃ och N ₂ . För att bekräfta detta läggs en liten mängd zinkdamm, vilket reducerar NO ₃ ^- om det finns tillgängligt i mediet, till N0 ₂ ^- vilket ger röd färg.

Således, om röd färg produceras, indikerar det att N0 ₃ ^- är närvarande i mediet oförändrat och bakterierna inte har förmåga att reducera nitrater. Om röd färg inte produceras, indikerar den att N0 ₃ ^- har minskat bortom N0 ₂ ^- till NH ₃ och N ₂ och bakterierna har förmåga att minska nitrater.

Material som krävs:

Provrör, konisk kolv, bomullsproppar, inokuleringsslinga, autoklav, bunsenbrännare, laminärflödeskammare, kassera burk, inkubator, nitratbuljong, zinkdamm, nitratreagens Lösning A, nitratreagens Lösning B, isolerade kolonier eller rena bakteriekulturer.

Procedur:

1. Ingredienserna av nitratbuljongmedium (innehållande nitrat som huvudkomponent) eller dess färdiga pulver som krävs för 100 ml buljongen vägs och löses i 100 ml destillerat vatten i en 250 ml konisk kolv genom skakning och virvling ( Figur 7.10).

2. Dess pH bestäms med hjälp av ett pH-papper eller pH-mätare och justeras till 7.2 med användning av 0, 1 N HCI om det är mer eller med användning av 0, 1 N NaOH om det är mindre. Kolven värms upp, om så krävs, för att lösa upp ingredienserna fullständigt.

3. Buljongen fördelas i fem provrör (ca 10 ml vardera), bomullspluggad, täckt med hantverkspapper och bundet med tråd eller gummiband.

4. Buljongörerna steriliseras vid 121 ° C (15 psi tryck) i 15 minuter i en autoklav.

5. Buljongörerna får svalna till rumstemperatur.

6. Provbakterierna inokuleras aseptiskt, företrädesvis i en laminär strömningskammare, i buljongen med hjälp av en inokuleringsslinga som steriliseras över bunsenflamma. Slingan steriliseras efter varje ympning.

7. De inokulerade buljongörerna inkuberas vid 37 ° C i 48 timmar i en inkubator.

8. 0, 5 ml av varje nitratreagenslösning A (innehållande sulfanilsyra) och nitratreagenslösning B (innehållande a-naftylamin) tillsätts i varje provrör, skakas väl och färgförändring observeras efter 15 minuter.