Experiment för identifiering av okända bakterier (med figur)

Experiment för identifiering av okända bakterier!

Princip:

Identifiering av okända bakterier är ett av de viktigaste ansvaren hos mikrobiologerna. Prover av blod, vävnad, mat, vatten och kosmetika undersöks dagligen i laboratorier över hela världen för förekomst av förorenande mikroorganismer.

Dessutom siktar industriella organisationer kontinuerligt på material för att isolera nya antibiotikaproducerande mikrober eller mikrober som ökar utbytet av omsättbara produkter, såsom vitaminer, lösningsmedel och enzymer. När de är isolerade, måste dessa okända mikrober identifieras och klassificeras.

Vetenskapen om klassificering kallas taxonomi och behandlar separationen av levande organismer i sammanhängande grupper. Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 8: e upplagan, är den officiella taxonomiska nyckeln som innehåller order, familjer, släkt och arter av alla kända klassificerade bakterier (bilaga III).

Med grundläggande kunskaper i färgmetoder, blir isoleringsteknik, bakteriell näring, biokemiska aktiviteter och bakteriernas tillväxtegenskaper, det blir lättare att identifiera eventuella okända bakterier.

Egenskaper hos få bakterier har givits i tabell 7.2. Andra bakterier kan identifieras på ett liknande sätt baserat på observationer och resultat som erhållits efter experimentella förfaranden.

Material som krävs:

Slider, kavitetsskivor, petriskålar, koniska kolvar, bomullsproppar, inokuleringsslinga, autoklav, bunsenbrännare, laminärflödeskammare, kassera burk, inkubator, näringsbuljong, näringsagar, gramfärgningsreagenser, media och reagens för biokemiska tester, föreningsmikroskop, isolerade kolonier eller rena kulturer av bakterier.

Procedur:

1. Gramfärgning av de okända bakterierna utförs. Förutom gramfärgning registreras dess morfologi och arrangemang också. Motilitetstest av bakterierna bestäms genom att hänga droppberedningen (Figur 7.25).

2. Genom att steril inokuleringsteknik inokuleras inokuleras bakterierna i två närings-agarskenor, ett näringsbuljongrör och till en närings-agarplatta medelst streck-inokulering. Efter inkubering används en snedkultur för att bestämma de okända bakteriens kulturella egenskaper.

Den andra används som en lagerunderkultur, om det skulle vara nödvändigt att upprepa någon av testen. Tillväxtegenskaper observeras också i buljongröret och koloniegenskaperna på plattan.

3. Utöva vård i steril teknik, för att inte förorena kulturer och därigenom få falska resultat, inokuleras bakterierna i respektive medium för att utföra de olika biokemiska testerna.

4. Det inokulerade mediet inkuberas vid de erforderliga temperaturerna under de erforderliga längderna.

observationer:

1. I gramfärgning, förutom gramreaktionen, registreras också bakteriens morfologi och arrangemang.

2. Bakteriernas kulturella egenskaper i näringsbuljong, på agarsken och på näringsagarplattor noteras.

3. Resultaten av de biokemiska reaktionerna registreras.

Tolkning av resultat:

1. Med hjälp av ovanstående inspelade data (T.ex. se tabell 7.1) och med hjälp av Bergeys Manual of Determinative Bacteriology identifieras bakterierna för släktet och arten. Man bör komma ihåg att resultaten kan variera beroende på stammarna hos varje art som används och hur länge bakterierna har bibehållits i lagerkulturen.

De observerade resultaten kan inte vara helt identiska med de förväntade resultaten. Därför väljs de bakterier som bäst passar resultaten. De identifierande egenskaperna hos få bakterier har angivit i tabell 7.2.

2. Alternativt, med hjälp av ovanstående data, ges kodnummer för de inspelade resultaten (se Tabell 7.3) och bakterierna identifierades enkelt med hjälp av datorprogram som är tillgängligt för Apple II, IBM PC eller TRS-80.

Programmet är utformat för att identifiera de okända bakterierna på grundval av procentandel av likhet mellan de okända bakterierna och de kända bakterierna med avseende på ovanstående observationer.

Att initiera programmet för Apple II eller IBM-PC:

(a) Skivan är infogad i den vänstra enheten.

(b) Datorn är påslagen.

(c) Programinstruktionerna följs av att skriva svaren, okänt bakterienummer och kodnummer som frågorna visas på skärmen.

För att initiera programmet för TRS-80:

(en) Datorn är påslagen.

(B) Skivan sätts in i den nedre enheten.

(C) Den orange knappen hålls intryckt.

(D) När du blir frågad, anges "datum (MM / DD / YY)".

(E) Orange knappen trycks in igen.

(f) Programinstruktioner följs av att skriva in svaren, okänt bakterienummer och kodnummer som frågorna visas på skärmen.

E. Automatiserade metoder för identifiering av okända bakterier:

Identifiering av okända bakterier genom manuell metod med hjälp av färgreaktioner, motilitetstest, kulturella egenskaper och biokemiska tester är en besvärlig, långvarig och tidskrävande process. För att göra processen lätt och kort har automatiska metoder utvecklats.

Dessa metoder använder i grund och botten samma biokemiska test som används i de manuella metoderna, men här utförs det automatiskt och tolkningen görs med ett datorstödt program.

Två sådana system som används för närvarande för automatisk identifiering av bakterier ges enligt följande:

1. MINI API-system

2. VITEK 2 System

F. Vidare bekräftelse:

(1) Serologiska test:

Serologiska tester kan utföras för ytterligare bekräftelse av de identifierade bakterierna. Till en suspension av de identifierade bakterierna (säg X) blandas en droppe av antiserumet (anti-X) mot den bakterien. Om det resulterar i bildning av klumpar eller fällningar (X-anti-X-komplex), bekräftas identifieringen.

Antisera för olika bakterier är kommersiellt tillgängliga. De produceras kommersiellt i olika laboratorier. Antiserum av särskilda bakterier produceras genom att injicera dödade eller dämpade celler av dessa bakterier (säg X) i ett laboratoriedjur.

Som försvarsmekanism producerar värddjuret antikroppar (anti-X) mot den bakterien som återstår i blodet. Blodet samlas in från detta djur och dess serum isoleras med speciella tekniker. Detta serum, som innehåller antikropp mot den bakterien, kallas antiserum av den bakterien.

(2) PCR-test:

Polymeraskedjereaktionstestet (PCR) är en snabb molekylär metod för bekräftelse av de identifierade bakterierna. Denna teknik används ofta för att upptäcka olika bakterier och virus snabbt och exakt.