Experiment för att ta reda på bakteriens förmåga att dekarboxylera olika aminosyror (med figur)

Experiment för att ta reda på bakteriernas förmåga att dekarboxylera olika aminosyror!

Princip:

Vissa bakterier har förmågan att dekarboxylera olika aminosyror till motsvarande aminer och CO2 eftersom de kan producera respektive "aminosyradekarboxylas" -enzymer.

Bland dem kan varje bakterie dekarboxylera endast några av aminosyrorna, medan de inte kan dekarboxylera de andra.

Således kan aminosyrorna, som en bakterie kan dekarboxylera och aminosyrorna, som det inte kan vara karaktäristiska för bakterierna. Aminosyradekarboxylasprovet utförs för att separat testa förmågan hos en bakterie att dekarboxylera aminosyror, såsom lysin, ornitin och argentin, med produktion av C02 och respektive aminer som cadaverin, putrescin och agmatin.

Om bakterierna kan

dekarboxylera någon eller flera av aminosyrorna, varvid respektive aminer produceras, vilka är alkaliska (basala) och därför ökar pH-värdet som ändrar färgen av bromokresol-lila från gul till lila.

I aminosyredecarboxylas-testet odlas testbakterierna anaerobt i en buljongmedium innehållande glukos, bromkresollila och en av aminosyrorna. Färgen på buljongen förändras initialt från lila till gul på grund av fallet i pH som härrör från syrorna som framställs genom fermentering av glukos. Om bakterierna har förmåga att dekarboxylera aminosyran ändras buljongens färg från gul tillbaka till lila.

Material som krävs:

Provrör, konisk kolv, bomullsproppar, inokuleringsslinga, autoklav, bunsenbrännare, laminärflödeskammare, kassera burk, inkubator, aminosyradekarboxylasbuljong, aminosyror (lysin, ornitin, arginin), flytande paraffin, isolerade kolonier eller rena kulturer av bakterie.

Procedur:

1. Ingredienserna i aminosyradekarboxylasbuljemedium (innehållande glukos och bromokresol lila som huvudkomponenter) eller dess färdiga pulver som krävs för 400 ml buljongen vägs och löses i 400 ml destillerat vatten i en 500 ml konisk flaska genom att skaka och virvla (Figur 7.11).

2. Dess pH bestäms med hjälp av ett pH-papper eller pH-mätare och justeras till 7.2 med användning av 0, 1 N HCI om det är mer eller med användning av 0, 1 N NaOH om det är mindre. Kolven värms upp, om så krävs, för att lösa upp ingredienserna fullständigt.

3. 400 ml buljong fördelas i fyra 250 ml koniska kolvar, så att varje kolv innehåller 100 ml buljongen.

4. Till tre av dessa kolvar sättes tre aminosyror, såsom lysin, ornitin och arginin separat (0, 5 gram vardera) och en hålls utan någon aminosyra för att fungera som kontroll. Kontrollen används för att skilja mellan tvåstegs färgförändringar i testmediet (dvs. från lila till gult och från gult till lila).

5. Buljongerna i de fyra koniska kolvarna fördelas i fyra separata uppsättningar provrör (ca 10 ml vardera), bomullspluggade, täckta med hantverkspapper och bundna med tråd eller gummiband.

6. Buljongörerna steriliseras vid 121 ° C (15 psi tryck) i 15 minuter i en autoklav.

7. Buljongörerna får svalna till rumstemperatur.

8. Flytande paraffin steriliseras genom upphettning vid 180 ° C i 3 timmar i en varmluftsugn.

9. Testbakterierna inokuleras aseptiskt, företrädesvis i en laminär strömningskammare, i buljongen med hjälp av en inokuleringsslinga som steriliseras över bunsenflamma. Slingan steriliseras efter varje ympning.

10. Den steriliserade flytande paraffinen hälls försiktigt aseptiskt i de inokulerade rören (ca 1 cm högt på mediet) för att ge anaerobt tillstånd.

11. De inokulerade buljongörerna inkuberas vid 37 ° C i en inkubator och observeras dagligen tills testet är positivt eller under en maximal period av 4 dagar.