3 Klassificeringar av agglutinationstekniker

Tre typer i vilka cellernas agglutinationstekniker klassificeras är: 1. direkt agglutination, 2. indirekt (passiv) agglutination och 3. omvänd (passiv) agglutination.

1. Direkt agglutinationstest:

Celler (såsom bakterier, svamp och erytrocyter) och olösliga partikelformiga antigener kan agglutineras direkt av deras specifika antikroppar. Antikroppen har två Fab armar med vilka den kan binda till antigener på två celler. På samma sätt binder många antikroppsmolekyler med ett antal celler för att bilda en gitter.

Denna gitterformation ses visuellt som klumpar. Därför indikerar bildning av klumpar närvaron av antigen-antikroppsbindning. Brist på agglutination indikerar frånvaron av antigen-antikroppsreaktion.

Användning av Direct Agglutination Test:

en. Identifiering av mikrober:

De bakteriekolonier som odlas i odlingsmedium identifieras med användning av känd antisera mot mikrober. Det antimikrobiella antiserum som producerar en synlig agglutination identifierar bakterierna.

b. Diagnos av mikrobiella infektioner genom att detektera närvaron av antikroppar mot mikrober i serumet. Kända mikrobiella antigener blandas med patientens serum och förekomsten av agglutination indikerar närvaron av serumantikroppar mot mikroben.

c. ABO-blodgruppering av humana erytrocyter (med användning av antisera).

Agglutinationstesterna görs antingen på glidglaset (glidagglutinationstest) eller i rör (provrör agglutinationstest).

jag. Slide agglutination testet är enkelt och enkelt att utföra och det behöver bara några minuter att utföra testet.

ii. Röragglutinationstest används för att kvantifiera mängden serumantikroppar mot en mikrobe genom seriell spädning av serumet och därefter blandning av den utspädda sera med konstant mängd mikrobiella antigener. Efter lämplig inkubation tas den högsta utspädningen av serumet som visar synlig agglutination som serumets titer (Till exempel Widal-rörtest, Brucella-rörtest). Titern reflekterar koncentrationen av antikroppar i serumet; högre titer, mer är koncentrationen av antikroppar.

Slidprov för att detektera serumantikroppar mot smittämnen används som initiala screeningtest. Sera av de positiva glidprovningarna bör testas genom rörtest för att bekräfta glastestresultaten. Slideprovet kan ge vilseledande resultat, särskilt med mycket höga serumantikroppsnivåer (t.ex. prozonfenomen med brucella antikroppar).

Det finns mycket egen variabilitet i agglutinationstestsystemen. När serumtitervärdena hos en patient kontrolleras vid två tillfällen är skillnaden mellan titervärdena signifikanta, endast när titervärdena skiljer sig åt med åtminstone två dubbla utspädningar [eller skillnad med två rör (fyra gånger det första värdet) ] (t ex i Widal rörtest utspättes serumet i två veck: 1 till 20, 1 i 40, 1 i 80, 1 i 160, 1 i 320 och 1 i 640. Om en patient har ett första Widal-test titer av 1 i 160, den andra Widal testtiter är signifikant om den är 1 i 640 eller mer än 1 i 640.)

Heterophile antikroppstest:

(Vanligen kallad mono-spot test) Heterophile antikroppstest är ett hemagglutinationstest för detektion av antikroppar mot Epstein Barr (EB) -virus som orsakar infektiös mononukleosjukdom. IgM-antikropparna som bildas under infektiös mononukleos korsreagerar med häst-RBC-ytantigener (förmodligen beroende på antigenisk likhet mellan EB-virus och RBC-ytproteiner från hästar) och orsakar hemaglutination.

Indirekt (passivt) Agglutinationstest:

I det indirekta agglutinationstestet är kända lösliga antigener belagda på andra celler (t.ex. får eller kalkonerytrocyter) eller inerta partiklar (t.ex. latex, bentonit, kol, polystyren), vilka fungerar som passiva bärare av antigener.

Många antigener kan beläggas på erytrocyter direkt eller efter behandling av erytrocyterna med formalin, tanninsyra eller glutaraldelyt. Fördelarna med att använda erytrocyter för beläggning är deras lätta tillgänglighet och lagringsförmåga. Dessutom är dessa tester mycket känsliga.

Testserum blandas med kända antigenbelagda erytrocyter eller latex.

Om testserumet har antikroppar agglutinerar erytrocyterna eller latexpartiklarna och producerar synliga klumpar.

Hemagglutinationsanalys:

Hemagglutinationstester är enkla och lätta att utföra. Både kvalitativa och kvantitativa tester kan utföras med hemagglutinationsteknik.

Testserumet späds seriellt i en spädningslösning i en mikrotiterplattbrunn.

RBC-belagda med ett känt antigen tillsätts i lika stora volymer till alla brunnarna. Lämplig positiv kontroll, negativ kontroll och reagens kontroller används. Plattan skakas väl och inkuberas på ett ställe fritt från vibrationer.

Efter inkubationen läses plattan med nakna ögon för agglutination.

Positiv reaktion:

Brunnar med agglutination indikerar bindningen av antigenbelagda RBC med motsvarande antikroppar i testserumet. Botten av den agglutinerade brunnen beskrivs för att ha ett mattutseende.

Negativ reaktion:

I brunnar där det inte finns någon antigen-antikroppsbindning förekommer inte agglutination av RBC. På grund av gravitationen sätter RBC sig ner i brunnarnas botten och ger en "knapp" som utseende, där kanten på "knappen" är skarp och vanlig.

Antikropptiter av testserumet:

Serumutspädningen som ger 50 procent agglutination jämfört med brunnen som visar fullständig (100 procent) agglutination är antikroppstiter av testserum. Hemagglutinationssatser är tillgängliga för antikroppsdetektering mot hepatit B-virus, HIV, thyroglobulin etc.

Gelatinpartikelagglutination:

Gelatinpartiklar är alternativa till erytrocyter för partikelagglutinationstest. Särskilda gelatinpartiklar (ca 3 μm diameter) har en mycket hydrofil yta och därför finns ingen icke-specifik bindning av material närvarande i provet. Gelatinpartiklar framställs genom fasseparation och tredimensionell tvärbindning vid 40 ° C. De erhållna partiklarna fixeras med formaldehyd eller gluteraldehyd.

Gelatinpartiklar har ingen antigenicitet och är följaktligen fria från problemen associerade med hemaglutinationsanalyser (såsom heterofilantikropparna, vilka kan reagera icke-specifikt med RBC och ge falskt positiva agglutinationer i hemagglutinationsanalyser).

Latexagglutinationstest:

Förutom erytrocyter och gelatin kan få andra partiklar också användas för att bära antigener på deras yta. Sådana antigenbelagda partiklar agglutinerar när de blandas med specifika antikroppar. Protein- och polysackaridantigener kan beläggas på latexpartiklar. Dessa antigenbelagda partiklar agglutinerar i närvaro av antikroppar.

Omvänd passiv hemagglutinationsanalys:

I omvända passiva hemagglutinationsanalyser belägges RBC med kända antikroppar. Dessa kit används för att detektera antigenerna i testproverna, såsom HBs Ag i serumet.

Rose-Waaller Test:

Detta är ett passivt hemagglutinationstest för att detektera reumatoid faktor. En av egenskaperna hos mänsklig reumatoid faktor är att den kan binda med humant IgG såväl som kanin IgG. Får erytrocyter är belagda med subagglutinerande mängder anti-får IgG antikroppar (uppväxt i kanin). De reumatoida faktorerna agglutinerar får-erytrocyter belagda med kanin-anti-får-IgG.

Flockningstest:

Flockbildning är en annan typ av antigen-antikroppskomplexbildningsanalys som används för att detektera och kvantifiera antikropparna. I motsats till agglutination och utfällning (där antigen-antikroppskomplexen sätter sig ner till rörets botten) testas antigen-antikroppsaggregaten i flockning och förblir i suspension som flockor och resultaten läses under ett mikroskop. Denna teknik används i VDRL-testet (test av venerala sjukdomsforskningslaboratorier) för att detektera antikroppar mot Treponema pallidum, bakterierna som orsakar syfilis.

Viral hemagglutination:

Viral hemagglutination är en särskild kategori av erytrocytagglutination, som inte involverar antigen-antikroppsreaktion. Vissa virus binder till ytproteinerna av RBC och denna bindning leder till spontan agglutination av RBC.

Spontan agglutination av RBC med ett virus kan förebyggas av specifika antivirala antikroppar. Antikropparna mot viruset binder till virala ytantigener och förhindrar interaktion mellan virus och RBC, och följaktligen aggregeras inte RBC. Det kallas viral hemagglutinationsinhiberingsanalys och används för att kvantifiera virala antikroppar i serum hos patienter.

Test för kalla agglutininer:

Antikroppar bildade under vissa infektioner (särskilt Mycoplasma pneumoniae) och autoimmuna sjukdomar har en särskild förmåga att agglutinera RBC vid 4 ° C. Dessa antikroppar kallas kalla agglutininer.

Serieutspädningar av patientens serum inkuberas med 1% RBC vid 4 ° C över natten.

Rören undersöks för närvaro av agglutination. Om agglutination föreligger reinkuberas rören vid 37 ° C.

Deagglutinering av RBC vid 37 ° C indikerar att serumet har kalla agglutininer. Kall agglutininanalys används för att diagnostisera Mycoplasma pneumoniae-infektion. 50 till 80 procent av akuta Mycoplasma pneumoniae-infekterade patienter har kallt agglutinin som tillhör IgM-typ.